写于 2018-09-29 06:08:13| 澳门星际网址官网| 澳门星际官网网址

作者:Kyselova,Zuzana Mechref,Yehia;康,Pilsoo; Goetz,John A; Dobrolecki,Lacey E;雪橇,乔治W;劳伦,劳伦;希基,罗伯特J; Malkas,Linda H; Novotny,Milos V背景:糖基化蛋白通过高度复杂的聚糖结构库在细胞间相互作用,免疫监视和各种受体介导的特定蛋白质功能中发挥重要作用异常糖基化多年来一直与癌症有关

方法:我们对来自乳腺癌患者(12期,I期; 11期,II期; 9期,III期;以及50期,第IV期)血清中的全甲基化聚糖进行了基于MALDI质谱(MS)的糖组学分析,并与血清一起进行了分析

来自27名无病女性血清糖蛋白进行酶促去糖基化,释放的聚糖在MALDI-MS分析前进行纯化和定量全甲基化我们应用各种统计分析工具,包括ANOVA和主成分分析,来评估MS谱

结果:2统计程序涉及几种唾液酸化和岩藻糖基化的N-聚糖结构作为极有可能的生物标记物Quantitati我们根据分子大小,寡聚糖分支数量和糖残基丰度对聚糖进行分类,根据癌症阶段发生变化

聚糖结构的唾液酸化和岩藻糖基化增加似乎表明癌症进展不同的统计评估独立证实了变化在8个N-聚糖的相对强度是乳腺癌的特征(P结论:基于MS的血清衍生成分的N-糖组分析似乎是一种有前景的高度敏感和信息丰富的方法,用于分期癌症的进展(c)2008美国临床化学协会糖基化蛋白通过高度复杂的聚糖结构库在细胞与细胞的相互作用,免疫监视和各种受体介导的特定蛋白功能中发挥重要作用(1-5)相应地,代谢功能障碍和疾病状态可能反映在异常聚糖的外观上或改变糖组中的定量比例这些观察结果为功能性糖组学领域的最新发展提供了理论基础(6-10)健康和疾病状态之间的差异糖组学测量甚至可能具有显着的临床诊断潜力,例如最近利用毛细血管电泳诊断肝硬化(11)对于N-连接和O-连接的糖缀合物,已经注意到癌症疾病和改变的蛋白质糖基化之间的某些联系已有数年(12-16),而该组中异常糖基化的最先进知识疾病的主要来源于肿瘤组织和细胞培养物的研究检测患者血液中癌症相关的变化是近期研究的一个明显目标,但由于高灵敏度聚糖测量的方法学困难,因此不太常见

,一些最近发现的癌症生物标志物人血清中的rs是糖蛋白(17-20),通常是粘蛋白型,大分子在本研究中,我们报道了人血清糖蛋白释放的N-聚糖的特征高度指示了乳腺癌的不同情况

在小(10μL)血清等分试样中,我们对源自循环蛋白的N-聚糖的组成谱进行灵敏和定量质谱(MS)5测量

这些谱可以通过模式识别技术进行统计学评估[主成分分析] (PCA)]就乳腺癌疾病阶段而言,不同阶段的N-聚糖数据聚类非常好,这与从明显没有疾病的个体记录的数据集进一步不同

这些聚类很容易分布到与阶段相关的群体中

通过病理评估确定的乳腺疾病这种类型的临床有用信息可以从少量血液中获得血清,没有活组织检查或肿瘤去除为了暗示某些寡糖结构作为生物标记物,我们通过非参数ROC和ANOVA分析对大约50个单独的N-聚糖进行了额外的统计评估(数据挖掘) 最后,为了进行比较,我们还检查了侵袭性和非侵入性乳腺癌细胞系的糖组学特征,以确定它们是否类似于源自患者标本的聚糖模式材料和方法材料胰蛋白酶(EC:34214)和PNGase F(EC)从Sigma获得:35152)我们从Aldrich购买了基质2,5-二羟基苯甲酸(DHB),三氟乙醇,氢氧化钠,CHAPS,Tris-HCl,焦磷酸钠,EDTA和EGTA; EM Science的氯仿,碘甲烷和氯化钠;来自Bio-Rad Laboratories的二硫苏糖醇(DTT)和碘乙酰胺(IAA);来自Mallinckrodt Chemical Company的碳酸氢铵和来自Fisher Scientific血清样本和临床诊断的乙腈来自无疾病女性志愿者和诊断患有不同乳腺癌阶段的女性的血清收集由临床团队根据机构审查委员会批准的临床进行试验在早晨空腹状态下采集静脉血样,在真空管中停滞最少,至少30分钟后,但在2小时内,将管在20℃下以120℃离心12分钟

在连续测量中使用前,在-80℃下冷冻保存在塑料瓶中我们生成了来自女性的样品的糖组分析,分为两类:(1)患乳腺癌的低风险女性和(2)已确诊疾病的绝经后妇女根据其无创或浸润性乳腺癌分层我们将乳腺癌患者分为4个亚组s(I-IV)基于疾病的严重程度(21)我们收集了来自27名健康个体的样本和来自II期的1,11期的12名患者,III期的9名和IV期的50名患者的样本详细描述了健康状况志愿者和临床诊断患者可以在本文在线版本的数据补充表1-2中找到,http:// wwwclinchemorg / content / vol54 / issue7癌症细胞系我们裂解癌细胞系(正常乳腺癌)上皮细胞,MCF10A;侵入性,MDA-MB-231,MDA-MB-435;基于CHAPS的缓冲液中的无创,578T,ADR-RES,BT549和T47D)(150 mmol / L NaCl,05%CHAPS,50 mmol / L Tris(pH 75),10 mmol / L焦磷酸钠,1 mmol / L EDTA,1mmol / L EGTA)然后我们使裂解物在16400g下进行超中心分离,将样品分离成细胞溶质和膜相关蛋白,并且200-μg蛋白质等分试样(通过Bradford测定法测定)进行与上述相同的程序

血清胰蛋白酶消化如所述(22),在加入胰蛋白酶之前将人血清样品还原并烷基化

简言之,将10μL人血清干燥,然后重悬于25μL25mmol/ L碳酸氢铵中, 25μL三氟乙醇和25μL200mmol/ L DTT我们将样品在60℃温育45分钟,加入10μL200mmol/ L LAA,并留下样品在室温下在黑暗中保持1小时我们加入25μLDIT以除去过量的IAA并再次在黑暗中将样品放置1小时最后,我们加入300μL水稀释样品和100μL碳酸氢铵储备溶液以调节pH使用1μg/μL[或1:50(wt / wt)比率]蛋白质组学级胰蛋白酶溶解于1mmol / ml进行蛋白水解消化将L HCl在37℃下孵育过夜(至少18小时)然后,通过在95℃下孵育10分钟来淬灭酶活性,并使其在室温下冷却从GLYCOPROTEINS释放M-GLYCANS并纯化

如前所述,从人血清样品中酶促释放N-聚糖

(23)简言之,我们向反应混合物中加入5mU PNGase F,随后在37℃下孵育过夜(18-22h)我们去除了去糖基化的使用用乙醇和去离子水预处理的C18 Sep-Pak柱(Waters)从反应混合物中提取肽我们使用活性炭微柱(Harvard Apparatus)进一步纯化含有释放的N-聚糖的含水洗脱液

用乙腈调节柱子和用01%三氟乙酸(TFA)平衡捕获稀释的样品后,用01%TPA洗涤微柱,用含有01%TFA的最小体积50%乙腈洗脱样品

 毛细管过氧化作用如上所述,衍生自人血清样品的N-聚糖最后在真空下干燥,随后使用毛细管方法进行全甲基化,其涉及使用熔融石英毛细管反应器(500μm内径; Polymicro Technologies)

用氢氧化钠珠粒填充(22)我们使用Hamilton 100-μL注射器和KD Scientific的注射泵将样品引入反应器中将干燥的样品重悬于50μLDMSO中,其中03μL在通过反应器输注之前加入L水和22μL甲基碘

这种全甲基化程序使氧化降解和“剥离”反应最小化并且防止需要过度清理(22)最后,用氯仿提取全甲基化的Nglycans并重复洗涤用水MALDI-TOF / TOF MS仪器入口我们将干燥的全甲基化样品重新悬浮于含有1mmol / L乙酸钠的2μL甲醇:水溶液(50:50)中并点样05-μL山姆将等分试样直接放在MALDI板上,与等体积的2,5-DHB基质混合[通过将10mg DHB悬浮于1mL水甲醇(50:50)中制备],并在真空下干燥

获得阳性质谱Applied Biosystems 4700蛋白质组学分析仪上的-ion模式该仪器配备Nd:YAG(355 nm)激光氩气在串联质谱测量中用作碰撞气体,碰撞池压力设定为65 x 10 ^ sup - 6 ^ torr获得的光谱是1000次激光照射的平均值数据评估我们使用DataExplorer 40(Applied Biosystems)和内部开发的软件工具(PeakCalc 20)进一步处理MS数据我们使用MarkerView(ABI)进行PCA,允许多变量信息的可视化我们使用监督的PCA方法,对样本组的先验知识,例如健康与患病的MS数据,使用峰值强度的自然对数进行加权

峰值强度也使用Pareto选项进行缩放,其中从每个值中减去平均值,差值除以标准差的平方根

此选项适用于MS数据,因为它可以防止强烈的峰值完全支配PCA组内的变异表示为SE(24)我们还使用ROC曲线分析AccuROC 25(Accumetric Corporation)评估潜在诊断变量的灵敏度和选择性,并使用单因素ANOVA检验对数据进行统计分析

当P组时,两组数据之间的差异被认为具有统计学意义

结果血清糖代谢概况在不同患者组的糖组学数据的差异测量中,必须达到高度的方法学精确度,以便个体差异(患者与患者)或“个人形象”是没有被测量误差所掩盖幸运的是,我们最近报道的聚糖映射程序(22)产生了数量我们能够识别和量化大约50种不同的N-聚糖结构,涵盖所有典型的结构类型,包括高甘露糖,杂化和复合型实体

如前所述(26),高能碰撞过程用于这种类型的串联质谱(MS / MS)产生可靠的结构鉴定每个记录的聚糖MS / MS用于识别大多数结构(数据未显示)在视觉上比较健康个体的糖组分那些患有乳腺癌的人,我们能够注意到,在1500-5000毫升的分子质量范围内,较小的N-聚糖(m / z:1500-2700)的丰度总体上减少了大量结构的丰富程度代表性的剖面图如图1,A和B所示,与阶段I和IV相比具有健康的轮廓,这些相对离子强度在剖面中变化(小的N-聚糖从第I阶段到第IV阶段,由于糖残基的不同添加而变成更大的结构

这一般观察结果与Rye和Walker发表的报告(13)以及最近关于肿瘤组织中糖基化的研究(6)一致(6) ,8,9)显然,在这些研究中观察到,在这些研究中观察到向肿瘤组织中的某些糖蛋白结构添加岩藻糖基和唾液酸残基的趋势

 N-GLYCAN概况的PCA在更准确地评估可能是特定癌症状况特征的N-聚糖模式时,我们转向PCA,这是一种化学计量工具,旨在通过定义减少的数据集来减少数据集中的维数

投影轴允许保留最初在数据集中的最大量的方差信息(27)对于所有受试者(健康和乳腺癌患者)测量的获得的概况数据如上所述(图2)进行PCA通过聚类分析乳腺癌早期阶段(阶段1,12;阶段11,11;阶段III,9)的受试者数量低于IV阶段(50)和无疾病的个体(27)最终我们的数据聚类表明健康个体的糖组学特征与乳腺癌早期个体的糖组学特征存在显着差异

这一观察结果支持了诊断潜力的概念用于识别乳腺癌的不同阶段,甚至可能通过血清样本的糖组学分析检测早期发病尽管这里研究的样本群体的异质性,但仍然实现了数据聚类

这一方面被认为是一个优势,因为这种异质性反映了真实的代表性

乳腺癌人群然而,这种异质性的存在也​​可能促使挑战性数据解释通过数据挖掘进行GLYCAN潜在生物标志物鉴定我们通过非参数ROC程序对推定的生物标志物进行了进一步的统计评估(28-30)

图3显示了ROC分析的一些例子

N-聚糖标记物,比较健康个体和IV期乳腺癌患者因此,具有m / z 3864的N-聚糖具有097的曲线下面积(AUC)值,表明其高诊断准确性(图3A),而另一个结构(m / z 2111)的AUC值仅为049,与随机变化相似(图3C)AUC val计算出具有m / z 1835的N-聚糖的088,使其仅为中等准确的测试(图3B)

在表1中,我们列出了通过ROC分析评估的N-聚糖的AUC及其P值来自单因子方差分析我们仅考虑了非糖基和患病实验组的比较产生P值的N-聚糖

有利的AUC值与来自ANOVA的P值的进一步相关性暗示8个N-聚糖,其相对强度发生深刻变化在乳腺癌发展期间(图4A)这些特定的N-聚糖因此代表了强大的生物标志物候选物,因为它们的特定结构的出现已经通过2种独立的统计学方法得到证实,这两种统计方法都在生物医学文献中被广泛接受,而癌细胞中的聚糖修饰数据有线和肿瘤,包括岩藻糖基化和唾液酸化,可用(31-35),似乎谨慎补充我们对血清聚糖水平的调查使用相同的分析程序对人乳腺上皮细胞(对照)和癌细胞系(侵入性和非侵入性)进行平行分析检查与血清相关的血清中涉及的8个N-聚糖结构,我们发现其中6个相似的趋势由侵入性(MDA-MB-231,MDA-MB-435)和非侵入性(578T,ADR-RES,BT549,T47D)乳腺癌细胞制备的提取物中的结构(图4B)能够形成肿瘤转移的侵袭性细胞系远离其原始转化位点,发现与非侵袭性细胞相比,糖组学模式有更显着的变化

此外,在正常细胞系中未观察到与m / z 3951和4226相关的N-聚糖,这表明它们具有潜在的作用肿瘤发生过程中的结构相关性根据分子大小,天线数量和糖残基丰度将N-聚糖分布成分分类(图5)可以指示某些一般情况疾病进展的趋势由于添加唾液酸残基和增强的岩藻糖基化而增加的N-聚糖大小的总体趋势是明显的明显的事实是通过AUC值和ANOVA选择的所有8个N-聚糖都被唾液酸化到不同程度(单 - ,二 - ,三 - 和四唾液酸化) 此外,这些结构中的5个是岩藻糖基化的(其中2个是二烃基化的),支持了在不同器官中癌症进展过程中岩藻糖基化受累的一般概念(图33)

图1来自10-μM的N-聚糖的MALDI镜像质谱] L等份的健康个体(上部痕迹)和I期乳腺癌患者(下部痕迹)(A)和健康个体(上部痕迹)和IV期乳腺癌患者(下部痕迹)(B)的血清[黑色方形] N-乙酰氨基葡萄糖; *,甘露糖; [白圈],半乳糖; [白三角形],岩藻糖; *,N-乙酰神经氨酸图2来自健康个体和乳腺癌血清的MALDI / MS N-聚糖谱的PCA得分图:疾病不同阶段的患者PC1,主要成分1; PC2,主要组成部分2讨论程序简单性,结合敏感性,信息内容和准确性,已成为临床诊断和预后方法最重要的属性之一乳腺癌检测的大多数程序依赖于基于病理学的标准,如肿瘤大小和等级活检或手术后激素受体和纤溶酶原激活物(37)的组织学评估,以及用于预测患者生存机会的组织学评估检测循环中的生物标志物仅限于单一蛋白质指标,例如CA 15-3,MUC1,癌胚抗原(CEA),BR 2729,组织多肽抗原(TPA),组织多肽特异性抗原(TPS)和人表皮生长因子受体2(HER-2)的脱落形式所有这些都提供(CA 15-3(38)和MUC1(8)可能除外)早期疾病所需的敏感性和特异性(39)因此,乳房X光检查和组织学病理学仍然是在疾病早期检测乳腺癌的主要方式

图3代表性ROC分析不同N-聚糖结构的AUC图反映了高精度(A),中等精度(B)和低精度( C)测试AUC表示为平均值(SE)符号如图1所示

来自血清样品的临床相关糖组图的附加验证来自涉及的N-聚糖结构与癌细胞系中与膜糖蛋白相关的结构的对应关系如图所示在图4和图5中,通过统计学标准验证,更强烈的糖基化与癌细胞相关,与其他地方(6,8,9)关于癌症进展引起的糖基化的最新观察一致在我们的测量中,侵入细胞与非侵入性细胞相比,能够形成远离其原始转化位点的肿瘤的细胞系代表了糖组模式的更极端变化根据AUC评估特定N-聚糖的诊断潜力图4具有高准确度ROC分析的8个N-聚糖的相对强度变化AUC值(如图1中的09符号来自癌细胞系的六个N-聚糖结构是与我们的血清测量中显着相关的那些(8个主要N-聚糖)共享糖谱图的相应差异揭示了具有恶性转化的核糖核酸化(在核心组分和分支区段内)的显着增加有趣的是,增加的核糖基化也已经与胰腺癌有关(33),结肠直肠癌(40),人白细胞癌(34)和肾癌(35 J此时,血清中各种唾液酸化结构的测量结果不太明显,因为各种唾液酸化的寡糖是作为O-和N-连接结构参与不同的恶性细胞(7-9,31-35,40),我们未来的研究将集中在这些结构上类型图5根据结构类型从健康个体与乳腺癌患者的血清中得到的N-聚糖相对强度变化的条形图下部迹线是上部迹线的缩放部分

总之,基于MS的糖谱分析这里描述的血清衍生成分提供了一种高度敏感和信息丰富的方法来区分癌症状况评估这种方法可以基于癌细胞异常糖生物学的健全知识,将其表面糖蛋白排放到周围的生物流体中 虽然目前尚不清楚哪种血清糖蛋白主要负责诊断上不同的N-聚糖,但选择的N-聚糖(或其模式)的统计分析为开发诊断和预后程序提供了可能,而MS仪器相对昂贵,该方法提供了在中等水平的测量通量下几乎绝对的结构信息PCA,ROC和ANOVA统计分析的MS数据独立地确认了8个N-聚糖(P补助金/资助支持:这项工作部分得到了国家研究所GM24349的资助

来自美国国立卫生研究院国家研究资源中心的健康(NIH)和RR018942,作为印第安纳大学国家糖组学和糖蛋白质组学中心对M Novotny的贡献

这项工作也得到了国家L Malkas的资助ROl CA83199的部分支持

美国国立卫生研究院癌症研究所,由印第安纳大学医学院的生物医学研究基金会授予R Hick ey,以及国防部卓越中心G81XWH-04-1-0468到G Sledge这项调查的初始阶段也得到了印第安纳州21世纪基金的资助

这项工作也得到了部分支持默克研究实验室为P Kang金融披露提供的奖学金:没有声明致谢:作者感谢Milan Madera开发PeakCalc 20 5非标准缩写:MS,质谱; PCA,主成分分析; DHB,2,5-二羟基苯并添加; DTT,二硫苏糖醇; IAA,碘乙酰胺; TFA,三氟乙酸; AUC,曲线下面积参考文献1 Clark GF,Dell A,Morris HR,Patankar M,Oehninger S,Seppala M从grycobiological的角度观察艾滋病:与人类胎儿防御系统假设的潜在联系假设Mol Hum Reprod 1997; 3:5- 13 2 Zachara NE,Hart GW O-GlcNAc在细胞调节中的新兴意义Chem Rev 2002; 102:431-8 3 Calarese DA抗体结构域交换是碳水化合物簇识别的免疫学解决方案Science(Wash D)2003; 300:2065 -71 4 Pochec E,Litynska A,Amoresano A,Casbarra A整合素α3β1的糖基化谱随黑素瘤进展而变化Biochim Biophys Acta 2003; 1643:113-23 5 Rudd PM,Elliott T,Cresswell P,Wilson IA,Dwek RA糖基化和免疫系统科学(Wash D)2001; 291:2370-6 6 Mechref Y,Novotny MV高灵敏度结核糖结合物的研究Chem Rev 2002; 102:320-70 7 Dwek MV,Lacey HA,Leathern AJ Breast癌症进展与d的减少有关唾液酸化和中性寡糖的逆境Clin Chim Acta 1998; 271:191-202 8 Baldus SE,Wienand JR,Werner JP,Landsberg S,Drebber U,Hanisch FG,Dienes HP MUC1,MUC2和寡糖表位在乳腺癌预后意义中的表达唾液酸化的MUC1表位Int J Ontol 2005; 27:1289-97 9 Handerson T,Camp R,Harigopal M,Rimm D,PawelekJβ1,6-支链寡糖在淋巴结转移中增加并预测乳腺癌的预后不良Clin Cancer Res 2005; 11:2969-73 10 Uematsu R,Furukawa J,Nakagawa H,Shinohara Y,Deguchi K,Monde K,Nishimura S高通量定量糖组学和糖型聚焦蛋白质组学小鼠真皮和表皮Mol Cell Proteomics 2005; 4:1977-89 11 Callewaert N,Van Vlierberghe H,Van Hecke A,Laray W,Delanghe J,Contreras R使用基于DNA测序仪的总血清蛋白糖组学无创诊断肝硬化Nature(Lond)Med 2004; 10:429 - 34 12哈基姆AA人类的机制b reast癌细胞逃避宿主免疫系统肿瘤1988; 35; 691-705 13 Rye PD,Walker RA分析从良性和恶性人乳房释放的糖蛋白:大小和岩藻糖基化与恶性肿瘤的变化Eur J Cancer Clin Oncol 1989; 25:65 -72 14 Hakomori S由异常的葡萄糖化和鞘氨醇(糖) - 脂质代谢定义的肿瘤恶性肿瘤,Cancer Res 1996; 56:5309-18 15 Kobata AA回顾性和前瞻性的糖样病学观点Glycoconj J 1998; 4:323-31 16 Alper J糖生物学:癌症上的甜食科学(Wash DC)2003; 301:159-60 17 Yang Z,Harris LE,Palmer-Toy DE,Hancock WS Multilectin亲和层析用于表征多种糖蛋白生物标志物候选物来自乳腺癌患者的血清Clin Chem 2006; 52:1897-905 18 Wong NK,Renouf DV,Lehmann S,Hounsell EF 表征与人卵巢肿瘤标志物CA125相关的寡糖J Biol Chem 2003; 278:28619-34 19 Shariat SF,Canto El,Kattan MW,Slawin KM Beyond前列腺特异性抗原:用于改善前列腺诊断和管理的新血清学生物标志物癌症Rev Urol 2004; 6:58-72 20 HJ,Miyamoto S,Lancaster KS,Kirmiz C,Li B,Lam KS,Leiserowitz GS,et al al profiling of grycans in serum,用于发现卵巢癌的潜在生物标志物J Proteome Res 2006; 5:1626-35 21 Fleming ID,Phillips JL,Menck HR,Murphy GP,Winchester DP国家癌症数据库报告最近的医院癌症计划进展到完整的美国癌症联合委员会/ TNM分期癌症1997; 80:2305-10 22 Kang P,Mechref Y,Klouckova I,Novotny MV用于质谱分析的grycoconjugates的固相全甲基化Rapid Commun Mass Spectrom 2005; 19:3421-8 23 Mechref Y,Novotny MV N-连接寡糖的质谱图谱和测序衍生自亚微米量的糖蛋白Anal Chem 1998; 70:455-63 24 Higgins JP,Thompson SG,Quantifying heterogeneity in meta-analysis Stat Med 2002; 21:1539-58 25 Wada Y,Azadi P,Costello C,Dell EA ,Dwek RA,Geyer H,等,糖蛋白聚糖分析方法的比较; HUPO人类疾病糖组学/蛋白质组计划多机构研究Glycobiology 2007; 17:411-22 26 Mechref Y,Kang P,Novotny MV通过基质辅助激光解吸/电离飞行时间/时间来区分唾液酸化聚糖的结构异构体飞行串联质谱Rapid Communications Mass Spectrom 2006; 20:1381-9 27 Musumaira G,Barresi V,Condorelli DF,Scire SA用于鉴定候选基因的生物信息学方法,用于开发新的癌症诊断Biol Chem 2003; 384:321- 7 28 Hanley JA,McNeil BJ接收器工作特性(ROC)曲线下面积的含义和用途放射学1982; 143:29-36 29 Pepe MS,Cai T,Longton G结合使用接收器下面积分类的预测因子运行特征曲线Biometrics 2006; 62:221-9 30 Swets M测量诊断系统的准确度科学(Wash D)1988; 40:1285-93 31 Shaw L,Yousefi S,Dennis JW,Schauer R CMP-N-乙酰神经氨酸羟化酶活性决定小麦胚芽淋巴瘤细胞系MDAY-D2的两个突变体中的凝集素结合表型Glycoconj J 1991; 8:434-41 32 Takano R,Muchrnore EA,Dennis JW Sialylation and tumor potential in tumor cell glycosylarton mutants Glycobiology 1994; 4:665-74 33 Mas E,Pasqualirti E,Caillol N,El Battari A,Crotte C,Lombarde D,Sadoulet MO人体胰腺组织中的Fucosyftransferase活动:癌组织与确定的肿瘤细胞系之间的比较研究Glycobiology 1998; 8:605-13 34 Liu F ,Zhang Y,Zhang XY,Chen HL将nm23-H1基因转染到人肝癌细胞系中抑制唾液酸化Lewis X,al,3岩藻糖转移酶VII和转移潜能的表达J Cancer Res Clin Oncol 2002; 128:189-96 35 Saito S,Yamashita S,Endoh M,Yamato T,Hoshi S,Ohyama C,Watanabe R,等人ST3Gal IV表达在人肾细胞癌中的临床意义Oncol Rep 2002; 9:1251-5 36 Elston CW,Ellis IQ,Finder SE乳腺癌病理预后因素[综述] Crit Rev Oncol Hematol 1999; 31:209-23 37 Isaacs C,Stearns V1 Haves DF乳腺癌复发的新预后因素Semin Oncol 2001; 28; 53 -67 38 Duffy MJ乳腺癌血清肿瘤标志物:它们具有临床价值吗

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